IBDV地方变异株VP2基因的克隆与特性鉴定

应用 RT- PCR技术对 1株分离于地方免疫鸡群中暴发的传染性法氏囊病病例的传染性法氏囊病病毒 ( infec-tious bursal disease virus,IBDV) HN0 2 6株的 VP2基因进行了克隆与序列分析 ,并与相应毒株的 VP2高变区核苷酸及氨基酸序列进行了比较研究。结果表明 ,HN0 2 6株的核苷酸和氨基酸序列与变异株 Var- A的同源性最高 ,分别达97.3%和 97.6 % ;其次为超强毒株 UK6 6 1 ,分别为 95 .7%和 95 .2 % ;而和弱毒株 PBG98的同源率仅有 92 .8%和90 .3%。其中 ,在第一、二亲水区 ,HN0 2 6株均有 1个氨基酸发生了变化 ,即第 2 2 2位转变为 E、第 31 8位转变为 D。更重要的是 ,其 2 4 9位和 2 5 4位上的氨基酸分别为 K和 S,这些均为变异株的特性。另外 ,HN0 2 6株的七肽区保持SWSASGS不变 ,且第 2 79位和 2 84位氨基酸分别为 D和 A,又完全具备强毒株的特性。因此 ,初步确定所分离的HN0 2 6为有较强致病力的变异株 IBDV。     

二丁酰环腺苷酸的合成与性质研究

以ATP为原料采用化学方法合成了dbcAMP及其钠盐 ,并对其理化性质和吸收特性进行了研究。经质谱分析 ,其结构为C18H2 3 N5O8PNa ,分子量为 4 90 .0 ;经紫外光谱测定其含量为 96 .0 % ,产品的得率为 85 .6 %。dbcAMP钠盐为白色粉末 ,可溶于水与乙醇 ,对热和酸碱比较稳定。经饲料添加和皮下注射dbcAMP检测其经消化道和皮下吸收的性能。通过测定饲喂和皮下注射dbcAMP后 0 .5h、1～ 96h不同时间内血液dbcAMP的浓度表明 ,饲料添加在 3h内达到最大浓度 84 .75pmol/mL ,皮下注射在 2h内达到最大浓度 92 .96pmol/mL ,之后血液中dbcAMP的浓度逐渐下降 ,在 96h达到较低水平。     

二丁酰环腺苷酸对猪胴体组成和肉品质的影响

通过皮下注射和饲料添加不同剂量dbcAMP进行饲养试验 ,研究其对肥育猪胴体组成和肉品质的影响。结果表明 :皮下注射 1.0mg/kg和饲料添加 2 0mg/kg对改善肥育猪的胴体组成和肉品质效果最好 ,眼肌面积分别提高31.99%和 36 .39% (P <0 .0 5 ) ;瘦肉率分别提高 12 .4 2 %和 11.94 % (P <0 .0 5 ) ;背膘厚分别降低 19.95 %和 2 0 .97%(P <0 .0 5 )。肌肉粗蛋白含量分别提高 10 .87%和 16 .5 4 % (P <0 .0 5 )。     

猪繁殖与呼吸综合症病毒四川株分离、鉴定及其病原特性研究

从四川地区发病仔猪分离到3株病毒(SC1、SC2和SC3)，电镜下可见病毒呈球形，有囊膜，病毒能在Marc-145细胞上生长并致细胞出现CPE，直径约55nm，核酸为RNA，不凝集猪、黄牛、犬、免、豚鼠、鸡、鸭、鹅的红细胞；pH值2，3，4，8，9，10处理30min和56℃处理60min病毒即失去对Marc-145细胞的感染能力。经病毒中和实验、特异性单克隆免疫荧光抗体和特异性RT-PER鉴定表明分离毒为美洲型猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)，分离病毒素回归30日龄仔猪可出现高热和呼吸道症状。研究首次从病原学角度证实美洲型PRRSV在四川的存在，利用分离毒制备的疫苗具有良好的免疫原性。     

禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究

以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原，制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体，经用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体，兔抗AIVIgG为第二抗体，建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明，鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL，兔抗AIV IgG的最适工作浓度为5μg/mL；对已知的阳性样品，用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上，且能检出其它亚型的禽流感病毒；与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应，说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测，结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。     

鸡IL-18真核表达载体的构建及其对新城疫疫苗免疫增强作用的研究

利用首次从鸡新城疫疫苗接种的鸡胚脾细胞中扩增出的鸡IL 18 全基因,构建IL 18 真核表达载体(pcDNA3 IL18),并观察其对新城疫疫苗的免疫增强作用。结果表明,同时接种pcDNA3 IL18 质粒和活疫苗的免疫鸡在接种后35 d内,特别是15 d之后所产生的HI抗体效价和T、B淋巴细胞增殖反应均高于单纯疫苗免疫组及pcDNA3 空白质粒和疫苗联合免疫组。其中,HI抗体效价在15 d 时差异显著(P<0 05),在30 和35 d时差异极显著(P<0 01); T淋巴细胞增殖反应在15 d后均表现为差异显著(P<0 05〉或极显著(P<0 01);而单纯疫苗组与空白质粒和疫苗联合免疫组之间的各测定指标则无明显的差异(P>0 05)。在35 d时进行攻毒, pcDNA3 IL18和疫苗联合免疫组的保护率为83.3%,而单纯疫苗免疫组、空白质粒和疫苗联合免疫组鸡的保护率则分别只有61.5%和66.7%。说明该pcDNA3 IL18真核表达质粒在鸡体内得到了表达,表达产物不仅能够显著增强新城疫疫苗所诱导的细胞免疫和体液免疫反应,而且还可以明显提高疫苗的保护率。     

亚洲璃眼蜱唾液腺一新功能基因的克隆与测序

HaB1是亚洲璃眼蜱雌成蜱唾液腺差异表达基因文库中的一个片段,根据其序列设计引物HaB1-GSP1和HaB1-GSP2,以唾液腺总RNA为模板,RACE法扩增获得HaB1的未知3′-末端。测定该末端序列,进行序列拼接,设计全长引物5-′CCAGTCCGAAGGAAGGGCG-3′和5-′TCTC-CGGGCACGTGAAGTGTC-3′。以cDNA第一链为模板,扩增获得基因全长。经核查表明,该基因为一新基因(登录号AY803896)。     

荷斯坦奶牛隐性乳房炎与乳用特征的相关性分析

随机抽取荷斯坦奶牛 472头 (1～ 11胎 )进行奶牛隐性乳房炎的检测 ,乳用特征性状 (楞角性、尻宽、尻角度、后肢侧视、蹄角度 )的线性评定 ,以及隐性乳房炎与乳用特征的相关性分析。结果表明 :奶牛隐性乳房炎的乳区阳性率与楞角性、尻宽、尻角度、后肢侧视、蹄角度的相关系数分别为 0 1171、0 10 3 0、0 0 681、0 0 180、-0 12 65 ,其中与楞角性、尻宽分别达到显著水平 (P <0 0 5 )的正相关 ,与蹄角度达极显著 (P <0 0 1)的负相关。奶牛阳性率与楞角性、尻宽、尻角度、后肢侧视、蹄角度的相关系数分别为 0 0 967、0 0 5 61、0 0 2 82、0 0 12 7和 -0 0 670 ,其中除与楞角性为显著水平 (P <0 0 5 )的正相关 (0 0 967)外 ,其余均不显著 (P >0 0 5 )。     

湖北利川马的现状分析及对策研究

对利川马的品种资源近几十年来的资料和调查的结果进行分析。用地方品种资源受威胁的程度和群体的有效大小等指标分析了利川马资源的受威胁程度。结果表明：利川马存栏数量在上世纪70年代以后呈逐渐下降的趋势；利川马的有效群体大小正在逐渐下降，处于潜在威胁中，也正接近最低威胁；整体上看，体尺、体重近几年不断提高．利川马产驹教有下降的趋势。     

血清1、2、4、5型鸭疫里默氏杆菌的RAPD

以37℃摇震培养舜口烛缸厌氧培养，从12种培养基中选择出鸭疫里默氏杆茼的最优培养基和培养条件。以血清1、2、4、5型的鸭疫里默氏杆菌代表株A1、A2、A3、A4为研究对象，培养增殖后分别提取基因组DNA，利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，对其基因组进行了DNA分析。从20条随机引物中筛选出8条随机引物，这8条引物对4种血清型的鸭疫里默氏杆菌的扩增图谱有较好的多态性，可作为分子标记鉴别4种不同血清型的鸭疫里默氏杆菌，同时还筛选出能在4个血清型的鸭疫里默氏杆菌代表株均出现相同的特征条带，而对照茼大肠杆菌、沙门氏茼无该条带的随机引物，从而为鸭疫里默氏杆菌病的分子诊断打下了一定基础。